Ложноположительный анализ на ВИЧ: причины, болезни схожие по симптомам, ошибка лаборатории, сдача анализа

  • Главная
  • Анализ крови
  • Венерология

Иммуноблот на ВИЧ позволяет обнаружить антитела к вирусным белкам, помещенным на специальную нитроцеллюлозную мембрану. Это высокоточное исследование, устанавливающее наличие фракций, в которых основные белки располагаются в виде небольших полос.

Оболочка вируса ВИЧ-1 содержит гликопротеины с молекулярной массой от 41 кд до 160 кд (килодальтона). Большое значение для проведения иммунного блоттинга имеет гликопротеин ВИЧ-2 с молекулярным весом от 32 кд до 140 кд. Белки сердцевины ВИЧ-1 и ферменты вируса представлены протеинами р17, р24, р55.

Возбудитель ВИЧ-2 состоит из белков, обозначаемых как р16, р25, р56. Они образуют его внутреннюю оболочку. В состав генома входят 6 регуляторных и 3 структурных гена. Нередко при делении клеток возникают генетические неточности и появляется несколько подтипов возбудителя.

Интерфероны, природа. Способы получения и применения.

Интерферон относится к важным защитным белкам иммунной системы. Открыт при изучении интерференции вирусов, т. е. явления, когда животные или культуры клеток, инфициро­ванные одним вирусом, становились нечувствительными к заражению другим вирусом. Оказалось, что интерференция обусловлена образующимся при этом белком, обладаю­щим защитным противовирусным свойством. Этот белок назвали интерфероном.

Интерферон представляет собой семейство белков-гликопротеидов, которые синтезируются клетками иммунной системы и соединительной ткани. В зависимости от того, какими клетками синтезируется интерферон, выделяют три типа: α, β и γ-интерфероны.

Альфа-интерферон вырабатывается лейкоцитами, и он получил название лейкоцитарного;бета-интерферон называют фибробластным, поскольку он синтезируется фибробластами — клетками соединительной ткани, агамма-интерферон — иммунным, так как он вырабатывается активированными Т-лимфоцитами, макрофагами, естественными киллерами, т. е. иммунными клетками.

Интерферон синтезируется в организме постоянно, и его концентрация в крови де­ржится на уровне примерно 2 МЕ/мл (1 международная единица — ME — это количество интерферона, защищающее культуру клеток от 1 ЦПД 50 вируса). Выработка интерферона резко возрастает при инфицировании вирусами, а также при воздействии индукторов интерферона, например РНК, ДНК, сложных полимеров. Такие индукторы интерферона получили названиеинтерфероногенов.

Помимо противовирусного действия интерферон обладает противоопухолевой защитой, так как задерживает пролиферацию (размножение) опухолевых клеток, а также иммуномодулирующей активностью, стимулируя фагоцитоз, естественные киллеры, регулируя антителообразование В-клетками, активируя экспрессию главного комплекса гистосовместимости.

Механизм действия интерферона сложен. Интерферон непосредственно на вирус вне клетки не действует, а связывается со специальными рецепторами клеток и оказывает влияние на процесс репродукции вируса внутри клетки на стадии синтеза белков.

Применение интерферона . Действие интерферона тем эффективнее, чем раньше он начинает синтезироваться или поступать в организм извне. Поэтому его используют с профилактической целью при многих вирусных инфекциях, например гриппе, а также с лечебной целью при хронических вирусных инфекциях, таких как парентеральные гепатиты (В, С, D), герпес, рассеянный склероз и др. Интерферон дает положительные результаты при лечении злокачественных опухолей и заболеваний, связанных с иммунодефицитами.

Интерфероны обладают видоспецифичностью, т. е. интерферон человека менее эффективен для животных и наоборот. Однако эта видоспецифичность относительна.

Получение интерферона . Получают интерферон двумя способами: а) путем инфицирования лейкоцитов или лимфоцитов кро­ви человека безопасным вирусом, в результате чего инфицированные клетки синтезируют интерферон, который затем выделяют и конструируют из него препараты интерферона; б) генно-инженерным способом — путем выращивания в производственных условиях рекомбинантных штаммов бактерий, способных продуцировать интерферон. Обычно используют рекомбинантные штаммы псевдомонад, кишечной палочки со встроенными в их ДНК генами интерферона. Интерферон, полученный генно-инженерным способом, носит название рекомбинантного. В нашей стране рекомбинантный интерферон получил официальное название «Реаферон». Производство этого препарата во многом эффективнее и дешевле, чем лейкоцитарного.

Рекомбинантный интерферон нашел широкое применение в медицине как профилактическое и лечебное средство при вирусных инфекциях, новообразованиях и при иммунодефицитах.

Общая информация

Иммуноблот – что это такое? Для того чтобы распознать у человека ВИЧ-инфекцию, необходимо пройти метод лабораторного исследования сыворотки крови на присутствие антител. Методику иммуноблоттинга еще называют вестерн-блот (western blot). Ее используют для обнаружения вирусных инфекций человека, как дополнительный экспертный способ. Он необходим для подтверждения ИФА – лабораторного исследования, позволяющего определить в крови наличие ВИЧ-антител. Иммуноблоттингом перепроверяют положительный анализ ИФА. Он считается наиболее чувствительным, сложным и дорогим.

Тестирование в домашних условиях

Наиболее часто неверные показатели анализа обнаруживаются при проведении домашнего тестирования. Получается ложноположительный результат на ВИЧ по причине большого количества ошибок, в результате чего складывается неверное представление о действительном состоянии организма. Ошибочный итог может быть следствием нескольких причин:

  1. Нарушение правил хранения тест–системы;
  2. Нестерильность материала;
  3. Неверное количество крови для анализа;
  4. Наличие других факторов (состояние здоровья, особенности питания, вредные привычки).

Домашний тест на ВИЧ удобен тем, что дает возможность сохранить анонимность — не каждый человек готов предоставлять свои данные из–за опасения разглашения информации в случае обнаружения инфицирования. Но, как показывает практика, выполнение теста дома дает самый большой процент ложноположительного результата на ВИЧ.

Отчасти в этом виноваты сами «авторы» процедуры либо по собственной халатности, либо по незнанию правил подготовки к анализу и особенностей выполнения тестирования. Достаточно часто ложный показатель выдают просроченные ВИЧ–тесты.

Предназначение

Что это такое – иммуноблот? Это методика лабораторного исследования сыворотки крови на наличие антител к вирусу. Во время проведения исследования специалист предварительно разделяет белки вируса в геле и переносит их на нитроцеллюлозную мембрану. Предназначена процедура иммуноблоттинга для определения ВИЧ на разных стадиях. На первом этапе очищенный вирус от составных частей подвергают электрофорезу, а антигены, входящие в его состав, разделяют по молекулярному весу.

Вирус иммунодефицита человека размножается в живой клетке, встраивая в нее свою генетическую информацию. На этом этапе человек становится носителем вируса ВИЧ, если был заражен. Специфика заболевания в том, что оно долгое время может никак себя не проявлять. Вирус разрушает лимфоциты, поэтому иммунитет человека снижается, и организм становится неспособным противостоять инфекциям. Если ВИЧ грамотно и вовремя лечить, пациент проживет до глубокой старости. Отсутствие терапии неминуемо приводит к летальному исходу. С момента инфицирования, но без лечения, максимальный срок жизни составляет не более десяти лет.

Типичные ошибки при диагностике ВИЧ инфекции

Забор биологического материала, доставка и оформление материалов, используемых при проведении лабораторной диагностики, должны соответствовать следующим правилам:

  1. Сопроводительная документация оформляется с указанием наименования тест-системы, ее срока годности и серии.
  2. Полностью указаны паспортные данные обследуемого, дата, место забора биологического материала.
  3. Сыворотка хранится не дольше установленного срока, для исследования берется допустимый объем биоптатат – не меньше 2-5 мл.
  4. Номер на флаконе соответствует указанному номеру в направлении.
  5. Забор биологического материала происходит по установленным правилам, а именно, из локтевой вены. В составе исследуемой крови не должно быть сгустков.

Для забора материала используется сухая пробирка. У новорожденных часто берут пуповинную кровь, указывая о таком факте в направлении.

Типичная ошибка врачей – хранение полученного материала дольше 12 часов при комнатной температуре и дольше 1 дня при температуре 4-8 градусов выше по Цельсию. За счет наступающего гемолиза искажаются результаты диагностического мероприятия.

Итак, к типичным ошибкам во время проведения диагностики ВИЧ-инфекции относят:

  • неправильный забор биологического материала;
  • неправильное хранение биоптата;
  • неправильная транспортировка диагностических систем;
  • длительное хранение тест-системы.

На результат влияет даже качество воды, используемой для промывания тары, в которую помещают биологический материал.

После получения результатов исследования лабораторный работник должен выдать для врача заключение. Если диагностика проводилась в «период окна», он назначает повторное проведение диагностики спустя определенное время. В любом случае, чтобы поставить диагноз «ВИЧ-инфекция», одного иммуноблота недостаточно. Необходима комплексная диагностика.

Особенности

Иммуноблот анализ – достоверный метод, который позволяет определить наличие антител к антигенам ВИЧ первого и второго типа. Если человек инфицирован, уже через две недели появляются антитела, которые могут обнаруживаться и намного позднее. Особенность ВИЧ в том, что количество антител быстро увеличивается и сохраняется в крови больного. Даже если они присутствуют, болезнь может не проявлять себя в течение двух и более лет. Метод ИФА не всегда точно определяет наличие заболевания, поэтому требуется подтверждение результатов с помощью иммуноблоттинга и ПЦР, если иммуноферментный анализ показал положительный результат.

Антинуклерные антитела (АНА) — группа аутоантител, которые связываются с ядрами собственных клеток организма и разрушают их. Они встречаются более чем у 90 % больных с диффузными болезнями соединительной ткани, а также часто отмечаются при аутоиммунных заболеваниях. На сегодняшний день известно около 200 разновидностей антинуклеарных антител. Однако в связи с редкой встречаемостью многих из них, не все разновидности используются для клинической диагностики.

Иммуноблот антинуклеарных антител позволяет в одном тесте одновременно провести исследование основных разновидностей антинуклеарных антител, что позволяет провести дифференциальную диагностику в пределах основных системных ревматических заболеваний. Каждая разновидность аутоантител, выявляемая с помощью иммуноблота, обычно отмечается у пациентов с характерной клинической картиной, поэтому спектр аутоантител позволяет не только диагностировать заболевание, а также выявить риск развития определенных характеристик заболевания.

Иммуноблот антинуклеарных антител обычно используют на втором этапе серологического обследования при положительном результате других тестов, указывающих на присутствие в сыворотке обследуемого антинуклеарных антител. К таким тестам относится выявление антинуклеарного фактора (АНФ), антинауклеарных антител и антител к экстрагируемому ядерному антигену (ЭНА). Метод характеризуется высокой специфичностью для диагностики ревматических системных заболеваний.

Особенности анализа

Гепатит С провоцирует РНК-содержащий вирус, способный передаваться через биологические жидкости организма. В составе возбудителя имеются белки, к которым наш иммунитет вырабатывает антитела. Их и обнаруживают в сыворотке крови зараженного гепатитом.

Первыми (через несколько недель) образуются белковые соединения класса IgM. Примерно через полтора месяца активизируется производство иммуноглобулинов класса IgG, максимальная концентрация которых наблюдается спустя полгода. Поэтому анализы целесообразно делать через 3-6 недель после вероятного заражения.

Для обнаружения антител используют недорогой иммуноферментный тест (ИФА). Это первичное исследование не всегда позволяет поставить точный диагноз. Поэтому дальше применяется специфическая технология – метод иммуноблота. Поводом для назначения дополнительного тестирования являются положительные или сомнительные результаты иммуноферментного анализа.

Иммуноблоттинг гепатита рекомендуется проводить, когда в крови появляются антитела. Тест дает возможность обнаружить широкий спектр специфических белков, продуцируемых защитной системой в ответ на проникновение патогена. Срок исполнения – до 5 рабочих дней.

Сроки определения противотрепонемных антител

Нужно знать, что ни один, даже самый точный метод, в том числе, иммуноблот, не позволит получить точных данных, если заражение сифилисом произошло несколько дней назад. Обусловлено это тем, что болезнетворные микроорганизмы находятся в инкубационном периоде на ранних этапах внедрения в организм, соответственно, иммунная система в указанные сроки не начинает продуцировать антитела, выявляемые в ходе проведения иммуноблота.

  • Продуцирование организмом антител IgM для борьбы с проникшей в организм сифилитической инфекцией начинается в период с седьмого по четырнадцатый день заражения сифилисом. Но вероятность обнаружения их в это время даже посредством высокоточных анализов крайне мала. Максимальной концентрации уровень антител достигает в период с шестой по девятую неделю инфицирования.
  • Полное исчезновение выявляемых анализом IgM происходит через три – шесть месяцев после курса терапевтического лечения. Если больной не получал лечение, подобное наблюдается через год – полтора после внедрения в организм сифилитической инфекции. Выявление антител возможно при первичном и вторичном периоде заболевания. При этом определение может быть исключено в том случае, если сифилис протекает в скрытой форме. Появление IgM после полного исчезновения говорит о повторном заражении или низкой эффективности лечения.
  • Выработка организмом специфических антител, отнесенных к классу IgG, начинается примерно через четыре – пять недель с момента внедрения бледной трепонемы в организм. В отличие от IgM, концентрация IgG постоянно увеличивается, достигая максимальной величины к двенадцати – двадцати четырем месяцам после инфицирования и сохраняясь на протяжении нескольких лет или всей жизни даже при условии успешного лечения.

Показания к назначению

Что это такое «иммуноблот» уже выяснили, но кому назначают данное исследование? Поводом сдать анализы на вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) методом иммуноблоттинга становится положительный результат ИФА. Необходимо пройти через иммуноферментный анализ пациентам, которые будут оперироваться. Кроме этого, следует сделать анализ женщинам, планирующим беременность, а также всем, кто ведет беспорядочную половую жизнь. Назначают иммуноблоттинг пациентам с ВИЧ, если результаты ИФА вызывают сомнения. Поводом для обращения к врачу могут стать следующие тревожные симптомы:

  • резкое похудение;
  • слабость, потеря работоспособности;
  • расстройство кишечника (диарея), которое продолжается в течение трех недель;
  • обезвоживание организма;
  • лихорадка;
  • увеличение лимфатических узлов на теле;
  • развитие кандидоза, туберкулеза, пневмонии, токсоплазмоза, обострение герпеса.

Пациенту не нужно подготавливаться перед сдачей венозной крови. За 8-10 часов до исследования нельзя принимать пищу. Не рекомендуется за сутки до сдачи крови употреблять алкогольные и кофейные напитки, заниматься тяжелыми физическими упражнениями, испытывать волнение.

Стоимость

Сколько стоит анализ? Иммуноблот на ВИЧ не относится к дешевым исследованиям. В среднем, скрининговое обследование иммуноферментными методами стоит от 500 до 900 рублей. Иммуноблоттинг – это верификационное исследование, стоимость которого составляет от трех до пяти тысяч рублей. Более сложные методы стоят намного дороже. Например, за анализ полимеразной цепной реакции (ПЦР) нужно будет заплатить около 12000 рублей.


Смотреть галерею

Как проводится исследование?

Как проводят анализ ИФА? Иммуноблот положительный/отрицательный подтверждает или опровергает результаты иммуноферментного анализа. Процедура исследования достаточно простая. Специалист проводит забор венозной крови, по времени это занимает не более пяти минут. После взятия проб место укола следует дезинфицировать и заклеить пластырем. Забор проводят натощак, поэтому после процедуры не помешает съесть плитку горького шоколада или выпить сладкий горячий напиток.

Для того чтобы получить направление на бесплатный анализ в государственном медицинском учреждении, необходимо посетить врача-терапевта. В целом, иммуноблот не отличается от других исследований крови по способу забора. Методика исследования простая. Если в крови человека присутствует вирус, организм для его разрушения начинает вырабатывать антитела. Для каждого вируса существует свой набор белков-антигенов. Выявление этих антител и есть основа методики иммуноблоттинга.

Как подготовиться

Специальная подготовка к сдаче анализа на гепатит не нужна. Достаточно придерживаться стандартных условий – сдавать кровь натощак или не раньше, чем через четыре часа после еды (необильной и нежирной).

Перед проведением исследования на гепатит не рекомендуется употреблять чай, кофе, соки и другие сладкие напитки. Разрешается питье простой воды.

Чтобы не стать заложником ложноположительного анализа

Анализ ИФА необходимо провести после сомнительного контакта через 6-12 недель. В этот период обнаруживаются антитела вируса иммунодефицита человека. В этом случае на 70% ложноположительный анализ можно исключить.

Перед сдачей крови на ВИЧ (ИФА) нужно не нарушать диету, не употреблять алкоголь, наркотики и не жить половой жизнью хотя бы за 2-3 недели до сдачи анализа на ВИЧ. Кровь сдается только натощак. Сколько врач возьмет крови, и сколько стоит анализ, а также срок годности анализа можно узнать непосредственно в медицинском центре. При имеющихся вирусных или инфекционных заболеваниях лучше анализ не сдавать, необходимо обратиться в лабораторию через 35-40 дней после выздоровления. При наличии других хронических заболеваний, следует сообщить врачу.

Даже если анализ оказался положительным, не нужно впадать в панику, возможно, он ложноположительный. Сколько месяцев должно пройти после первой сдачи?

Через 3-4 месяца анализ ИФА уже можно пересдать. У человека, в крови которого нет вируса иммунодефицита, результат будет гарантированно отрицательным.

Многих людей интересует вопрос о том, сколько живет ВИЧ? Вирус иммунодефицита человека, попадая на воздух, гибнет практически мгновенно. Погибает он при температуре выше 40°C. Поэтому если бы можно было подогреть кровь человека до такой температуры, ВИЧ был бы побежден, и не умирало бы столько людей, сколько на сегодняшний день погибает от вируса.

Трактовка результата

Самые распространенные методы диагностики инфекции ВИЧ – это иммуноферментный анализ и иммуноблот. Они ипользуются для определения в сыворотки крови антител к вирусу иммунодефицита. Наличие инфекции обычно подтверждают двумя тестами: скрининговым и подтверждающим. Интерпретация результатов исследования должна проводиться врачом, он же ставит диагноз и назначает лечение. Если иммуноблот положительный, это означает, что в организме человека присутствует вирус.

Положительный результат не должен стать поводом для самостоятельного лечения, так как у каждого пациента может быть своя картина заболевания. Качественный анализ включает скрининговый и вертификационный. Если у пациента не обнаружен вирус, то в результате указывают «отрицательно». При обнаружении методом скрининга проводят дополнительное вертификационное исследование. Иммуноблот – это анализ, который подтверждает или опровергает скрининг. Если на тест-полоске появляются потемнения на определенных участках (места локализации белков), ставят диагноз «ВИЧ». Если результаты вызывают сомнения, анализы проводят в течение трех месяцев.

Не допустить заражение вирусом иммунодефицита можно, если соблюдать определенные правила: избегайте случайных половых связей, используйте презерватив во время контактов, не принимайте наркотики. Если болезнь обнаружена у беременной женщины, важно четко соблюдать рекомендации лечащего врача, не забывать проходить обследования на предмет наличия вируса.

Линейный метод

Принцип иммуноблоттинга включает:

  1. Использование нативного вирусного вещества ВИЧ-формат или антигенов в формате Western -Blot.
  2. Соединение белков ВИЧ с отдельными антителами, выявленными в сыворотке крови.
  3. Процесс инкубации, происходящий с добавлением меченных антител к человеческим Ig.
  4. Расшифровку окрашенных полос.

Анализ позволяет врачу своевременно провести интерпретацию результатов исследования. Положительный блот расшифровывают как 2ENV+/- GAG+/POL, неопределенный — 1 ENV+/- GAG+/POL. Отрицательный результат предусматривает отсутствие полос.

Для выполнения анализа применяют рекомбинантный и лизатный иммуноблот. Исследование является специфичным и составляет 99,5%.

Может ли результат анализа быть расшифрован как ложный, интересуются больные. Полученные данные могут быть сформированы в результате стимуляции защитных сил организма (беременности, гемодиализа). При подозрении на острый ретровирусный синдром и контакт с больным ВИЧ-инфекцией пациенту рекомендуют сдать сыворотку на реакцию ПЦР. Повторное серологическое исследование подтверждается путем измерения вирусной нагрузки в представленном образе биологического материала.

Частые вопросы

Какие стадии включает иммуноблот?

  1. Подготовка стрипа.Предварительно очищенный и разрушенный до составных компонентов вирус иммунодефицита (ВИЧ) подвергается электрофорезу, при этом входящие в состав ВИЧ антигены разделяются по молекулярному весу. Затем методом блоттинга (аналог выдавливания на «промокашку» избытка чернил) антигены переносят на полоску нитроцеллюлозы, которая отныне содержит невидимый пока глазом спектр антигенных полос, характерный для ВИЧ.
  2. Исследование пробы.На нитроцеллюлозную полоску наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и т.п.), и если в пробе есть специфические антитела, то они связываются со строго соответствующими им (комплиментарными) антигенными полосами. В результате последующих манипуляций результат этого взаимодействия визуализируется – делается видимым.
  3. Трактовка результата.Наличие полос в на определённых участках нитроцеллюлозной пластины подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определённым антигенам ВИЧ.
  • Полоска А – Положительный контроль
  • Полоска В – Слабоположительный контроль
  • Полоска С – Отрицательный контроль
  • Полоска D – Положительный образец (обнаружено присутствие антител к ВИЧ-1)

Как расшифровать анализ?

Если ИФА показал наличие всех или почти всех антител к антигенам согласно данной тест-системы, это обозначает положительный анализ на ВИЧ. Если ответ после проведения второго серологического иммуноферментного анализа положительный, то необходимо провести иммуноблот. Расшифровка результатов его будет более верной. Если иммуноферментный анализ дал положительный результат, следующий анализ иммуноблота так же показал наличие ВИЧ, то ставится заключительный результат.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *