Антиген к ВИЧ: что собой представляет, какую роль играет в диагностике?

Оценочные испытания иммуноферментной тест-системы «DIA-HIV-Ag/Ab»

Я верю, что когда-нибудь мы будем жить в «нулевом» обществе: «ноль» — новых случаев ВИЧ-инфекции; «ноль» — дискриминации; «ноль» — смертей, обусловленных СПИДом.

Исполнительный директор ЮНЭЙДС
Мишель Сидибе,
Письмо к партнерам, 2011 год.

В мае 2011 года на 64-й сессии Всемирной ассамблеи здравоохранения государства-члены ВОЗ приняли «Глобальную стратегию сектора здравоохранения по ВИЧ/СПИДу на 2011-2015 годы», призванную к 2015 году остановить распространение ВИЧ/СПИД и положить начало тенденции к сокращению заболеваемости. Одной из стратегических директив, которыми ВОЗ и страны будут руководствоваться в своей деятельности в ближайшие пять лет, является оптимизация результатов профилактики, диагностики, лечения и ухода при ВИЧ-инфекции. Среди мер по предотвращению распространения ВИЧ-инфекции особое внимание уделяется улучшению качества средств диагностики ВИЧ/СПИД.

Проблема ранней диагностики ВИЧ-инфекции остается актуальной и может быть решена внедрением в лабораторную практику высокочувствительных диагностических иммуноферментных тест-систем 4-го поколения. Преимуществом данного комбинированного анализа является возможность одновременного определения в сыворотке или плазме крови антигена р24 ВИЧ-1 и суммарных ВИЧ1/2-специфических антител, что позволяет сократить период диагностического окна и выявлять ВИЧ-инфекцию не ранних сроках.

Разработанная на предприятии Частное акционерное общество «Научно-производственная компания «Диапроф-Мед» тест-система 4-го поколения для диагностики ВИЧ-инфекции сконструирована в «сендвич» варианте твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с двухэтапным внесением конъюгатов и введением мощной системы биотин-стрептавидинового усиления специфического сигнала. Значительное увеличение чувствительности анализа достигнуто применением в составе конъюгатов, выявляющих иммунные комплексы, смеси биотинилированных коротких рекомбинантных и синтетических аналогов вирусных антигенов, а также биотинилированных высокоаффинных моноклональных антител, распознающих антиген р24 ВИЧ-1.

В настоящей работе с использованием международного стандарта антигена р24 ВИЧ-1 и коммерческих панелей сывороток исследованы качественные характеристики и диагностические показатели данной тест-системы.

Материалы и методы

Иммуноферментный анализ
Тест-система иммуноферментная 4-го поколения «DIA-HIV-Ag/Ab».

В составе иммуносорбента тест-системы использованы рекомбинантные антигены Env-1 ВИЧ-1 и Env-2 ВИЧ-2, а также моноклональные антитела (МКАТ), распознающие антиген р24 ВИЧ-1. Конъюгат№1 состоит из смеси биотинилированных конъюгатов на основе МКАТ, распознающих антиген р24 ВИЧ-1, и аналогов вирусных антигенов Env-1 и Env-2. При внесении в лунки планшета образцов ВИЧ-инфицированной крови и конъюгата №1 антиген р24 ВИЧ-1 связывается с МКАТ в составе иммуносорбента и биотинилированного конъюгата. Специфические антитела взаимодействуют одновременно с антигенами Env-1 и Env-2 в составе иммуносорбента и биотинилированного конъюгата. Образовавшиеся комплексы выявляются конъюгатом стрептавидина с перксидазой хрена. Специфические антитела, не связавшиеся с биотинилорованным конъюгатом, выявляются пероксидазными конъюгатами антигенов Env-1 и Env-2 в составе конъюгата №2 (для предотвращения «хук-эффекта»). После отмывания несвязанных компонентов в лунки добавляют раствор проявителя. Пероксидазную реакцию останавливают, добавляя стоп-реагент. Учет результатов проводят на спектрофотометре в двуволновом режиме при длине волны 450/620 нм.

Панели, стандарты, образцы сывороток
Аналитическую чувствительность тест-системы на антиген р24 ВИЧ1 определяли с использованием 1-го Международного стандарта ВОЗ HIV p24 (NIBSC code 90/636).

Способность тест-системы диагностировать раннюю ВИЧ-инфекцию исследовали на 9 сероконверсионных панелях сывороток: HIV6240, HIV 6243, HIV6247, HIV6248, HIV9012, HIV9017, HIV12007 (ZeptoMetrix Corp., США) и PRB 965, PRB 966 (SeraCare Life Sciences, CША).

Диагностическую эффективность тест-системы определяли при тестировании 72 сывороток крови ВИЧ-инфицированных, содержащих специфические антитела в различных концентрациях, из них 32 образца с антителами к ВИЧ-1 и 41 – к ВИЧ-2.

Результаты и обсуждение

Исследование параметра чувствительности тест-системы «DIA-HIV-Ag/Ab» по выявлению антигена р24 ВИЧ-1 проводили с использованием 1-го Международного стандарта ВОЗ HIV p24 (NIBSC), последовательно разведенного, согласно прилагаемой Инструкции, отрицательной сывороткой от 25 до 0,04 МЕ/мл. По результатам тестирования данных образцов в трех повторах (табл.1.), порог чувствительности тест-системы по антигену р24 ВИЧ1 составил 0,78 МЕ/мл.

Таблица 1: Результаты определения аналитической чувствительности тест-системы «DIA-HIV-Ag/Ab» по выявлению антигена р24 ВИЧ-1.

Определение способности тест-системы «DIA-HIV-Ag/Ab» выявлять раннюю ВИЧ-инфекцию проводили с использованием 9 сероконверсионных панелей сывороток. Каждая панель сывороток состояла из образцов от ВИЧ-инфицированного пациента, отобранных в различные сроки и исследованных с использованием коммерческих диагностикумов: ИФА-тест для определения антигена р24 ВИЧ-1, иммуноблот и иммуноферментная тест-система 4-го поколения с СЕ-маркирорвкой (тест-система сравнения).
Результаты проведенных испытаний тест-системы на 7 панелях сывороток производства ZeptoMetrix представлены в табл.2.

Таблица 2: Результаты тестирования сероконверсионных панелей сывороток производства ZeptoMetrix в тест-системе «DIA-HIV-Ag/Ab.

Согласно паспортным данным к панели HIV 6240, образцы №№ 7-12 (21-45 день от первой донации крови) содержат антиген р24 ВИЧ-1, в образце №13 он уже не выявляется, иммуноблот диагностирует антитела с 10-го образца. Тест-система «DIA-HIV-Ag/Ab» и ее коммерческий аналог определяют положительными все сыворотки, начиная с 8-го образца (23 день от первого забора крови у пациента). При тестировании панелей HIV 6243, HIV 6248, HIV 9017, HIV 12007 данные тест-системы 4-го поколения определяли положительными сыворотки с первого образца, в котором обнаружен антиген р24 ВИЧ-1. При тестировании панели HIV 9018 указанные тест-системы определяли положительными образцы №№ 9-11 (28-35 день от первой донации крови), в то время как тест-система, предназначенная только для выявления антигена р24 ВИЧ-1, выявила его на 3 дня раньше (в образце № 7). В панели HIV 6247 тест система сравнения и «DIA-HIV-Ag/Ab» определяли положительными все сыворотки, начиная с образца № 8.

Результаты тестирования 2-х сероконверсионных панелей производства SeraCare Life Sciences представлены в табл.3. Согласно полученным данным, тест-система «DIA-HIV-Ag/Ab», как и ее аналог 4-го поколения, выявляли положительные сыворотки одновременно с тест-системой, предназначенной для определения антигена р24 ВИЧ-1, и в более ранние сроки, чем иммуноблот.

Таблица 3: Результаты тестирования сероконверсионных панелей сывороток производства SeraCare Life Sciences в тест-системе «DIA-HIV-Ag/Ab.

Для определения параметра чувствительности тест-системы «DIA-HIV-Ag/Ab» были протестированы сыворотки больных ВИЧ, которые содержали антитела к ВИЧ-1 (32 образца) и ВИЧ-2 (41 образец). Все сыворотки определены положительными с высокими значениями ОП/cut –off (данные не представлены).Таким образом, исследования диагностической способности тест-системы «DIA-HIV-Ag/Ab» показали, что она имеет высокий показатель чувствительности как по антигену р24 ВИЧ-1, так и специфическим антителам, что позволяет ей выявлять ВИЧ в ранние сроки на уровне лучших коммерческих аналогов, имеющих СЕ-маркировку.

Вирусный гепатит C – болезнь печени, которая чревата развитием цирроза, рака, недостаточности органа. Одним из методов диагностики является анализ на антитела Anti-HCV, хотя он еще назначается для профилактики инфекции людям, составляющим группу риска. Рассмотрим подробнее, что это такое, когда назначается анализ и что показывает.

Существует ли ПРИВИВКА от Гепатита С? ДаНет

Анализ крови Anti-HCV: что это означает?

Данный анализ представляет собой иммуноферментное исследование, определяющее антитела к HCV – вирусу гепатита C. Кровь в объеме 20 мл берут из периферической вены, помещают в центрифугу, дают отстояться, пока плазма отделится от кровяных элементов. Потом проводится исследование.

Возможно обнаружение иммуноглобулинов трех классов, которые позволяют определить наличие болезни и стадию: скрытый период, острое или хроническое течение, ранее перенесенное заболевание, которое не лечилось.

Есть 2 класса иммуноглобулинов, помогающие установить стадию болезни – M и G. Теперь разберемся, что это значит. M – острая фаза, титр нарастает первые несколько месяцев после заражения. Благодаря современной трехкомпонентной системе излечиваются больше 95% инфицированных. G – хроническая форма. Прогноз неблагоприятный, лечение затруднено. Редко получается полноценно очистить гепатоциты от вирусных частичек.

Кому нужно сдавать анализ крови Anti-HCV?

Анализ можно сдавать без направления от доктора. Такую услугу оказывают различные лаборатории, медцентры. Однако есть определенные случаи, требующие провести исследование:

  1. Желание стать донором крови.
  2. Переливание крови либо ее компонентов в прошлом.
  3. Тесные контакты с зараженным, включая половые связи (возможность заражения при незащищенном половом контакте достоверно не подтверждена, но и не исключена).
  4. Прием инъекционных наркотиков.
  5. Рождение ребенка от больной матери – малышу нужно пройти исследование на анти-HCV, потому что вероятность его заражения – до 20%.
  6. Повышение уровней АЛТ, АСТ вследствие медицинского вмешательства.
  7. Вторичные признаки поражения печени (для исключения/подтверждения наличия заболевания).
  8. Установка эффективности лечения.

Обычно исследование на антитела проводится массово, являясь средством выборочной диагностики в определенной местности. Однако любой может самостоятельно сдать тест, если обнаружит симптомы поражения печени.

Виды антител к вирусу HCV

При инфицировании в крови обязательно обнаруживается маркер Anti–HCV Abbott ARCHITECT. Это антиген из вирусной оболочки. Он становится причиной болезни, разрушает печеночные клетки, вызывает тяжкие осложнения – цирроз, рак, летальный исход. Обнаружить маркер можно только спустя более 3 недель после заражения, когда завершается инкубационный период. Если он выявляется через полгода, это уже признак хронического заболевания.

Гепатит с положительным Anti-HCV еще не окончательно подтвержден, поэтому требуется более доскональное исследование. При этом сами антитела делятся на несколько типов. Основных выделяют 2:

  1. Anti-HCV класса IgM – показатели острого или недавно стартовавшего процесса. Такие антитела образуются через 4-6 недель после заражения.
  2. Anti-HCV класса IgG. Вырабатываются позже, спустя 11-12 недель поле инфицирования. Свидетельствуют о хронизации или затяжном течении недуга.

На практике обычно определяют Anti-HCV сумм, то есть суммарные антитела к вирусу гепатита. Они образуются под воздействием структурных компонентов инфекционного агента через месяц с момента заражения. Остаются навсегда или пока не удаляется возбудитель.

Некоторые лаборатории ищут антитела не в целом к возбудителю, а к отдельным протеинам:

  1. Anti-HCV класса core IgG. Появляются в ответ на белки из вирусной структуры через 11-12 недель после инфицирования. Означают, что клетки возбудителя активно делятся, а болезнь прогрессирует.
  2. Анти-NS3 – показатели острого течения инфекционного процесса.
  3. Анти-NS4 – признаки затяжной болезни. Иногда еще помогают определить степень печеночного поражения.
  4. Анти-NS5 – свидетельствуют о присутствии вирусной РНК. Отмечается повышенный риск того, что болезнь станет хронической.

Однако антитела к белкам NS3, NS4, NS5 на практике выявляют редко. Причина банальна – это сильно увеличивает цену комплексной диагностики. Кроме того, почти всегда установления суммарных антител с общей вирусной нагрузкой хватает для уточнения диагноза, выяснения стадии патологического процесса, назначения адекватного лечения.

Как сдают анализ

Это исследование не требует сложной подготовки. Однако необходимо соблюдать некоторые рекомендации перед проведением анализа крови Anti hcv total. Что это за правила?

  1. Иследование всегда проходят утром натощак. Можно только пить чистую воду.
  2. За день до сдачи крови из рациона исключают острые, жирные, сладкие, соленые блюда и алкоголь.
  3. За несколько часов до сдачи анализа не следует курить.
  4. Если пациент принимает какие-либо лекарственные средства, нужно предупредить об этом врача.

Что делать если обнаружили антитела к вирусу гепатита С?

Если исследование показало наличие к HCV вирусу at (антител), необходимо провести другие тесты для подтверждения диагноза:

  1. Сделать биохимию крови – установление концентраций трансаминаз (АЛТ, АСТ), билирубина, его фракций.
  2. Снова сдать анализ в следующем месяце.
  3. Сделать ПЦР – выявление присутствия РНК HCV (генетического вирусного материала) в крови, его уровня.

Лишь при положительных результатах комплексной диагностики заболевание становится подтвержденным. Пациенту будет показано продолжительное наблюдение и лечение у врача-инфекциониста.

Почему антитела к HCV есть, а вируса по ПЦР нет?

Анализ Anti HCV, подтверждающий выработку антител к вирусу, – еще не означает на 100%, что пациент заболел. Результаты бывают ложноположительными, которые впоследствии опровергаются. Рекомендуется дополнительное проведение полимеразной цепной реакции, которая признается максимально эффективным диагностическим мероприятием.

Однако случается так, что ПЦР выдает отрицательный результат, хотя антитела выявляются. Это случается при незначительных концентрациях вируса, не дающих реакции. Инфекционный агент способен покинуть организм, не начав действовать. Ложноотрицательные результаты встречаются только в 5% случаев. Однако совместное проведение ПЦР и HCV диагностики дают большую точность, хоть это и удорожает процедуры.

Читайте далее:

О чем говорит такой результат анализа

Маркер HBsAg Abbott ARCHITECT в анализе на гепатит обнаруживается при инфицировании человека. Этот антиген находится в оболочке вируса, который является причиной возникновения заболевания. Опасность инфицирования человека данным вирусом заключается в деятельности антигена, который разрушает клетки печени, вызывая тяжелые последствия для организма, вплоть до летального исхода.

Инкубационный период заболевания длится более двадцати дней, по истечении которых выявляется антиген HBsAg Abbott ARCHITECT. Если в результате терапии данный показатель обнаруживается через полгода, то делается заключение о переходе заболевания в хроническую стадию.

Отрицательный результат анализа ставится при отсутствии антигена в крови человека. Для устранения сомнений, повторный тест проводится спустя три недели, чтобы выдержать необходимый срок для окончания инкубационного периода гепатита.

Повторное исследование крови необходимо, так как имеется вероятность нахождения клеток вируса в дефектном состоянии, кроме того возможно проникновение в организм сразу нескольких инфекций, деятельность которых искажает общую картину анализа.

Положительный результат тестирования означает, что в крови человека обнаружена инфекция.

В этом случае пациента также отправляют на повторное исследование, чтобы исключить возможность ошибки работников лаборатории.

Что такое гепатит C?

Гепатит C — это заболевание, вызываемое вирусом HCV. Инфекция передается через кровь и половым путем. Возбудитель болезни поражает клетки печени, в запущенных случаях возникает цирроз. Патология проявляется следующими симптомами:

  • слабостью и утомляемостью;
  • патологическим разрастанием печеночной ткани;
  • вздутием живота и увеличением селезенки;
  • кожа и белки глаз становятся желтоватыми.

Такие явно выраженные признаки могут возникнуть через 14 дней после того, как вирус попадает в организм. Но нередко инкубационный период затягивается до полугода. Гепатит — коварное заболевание, длительное время у больного могут отсутствовать какие-либо жалобы. За этот период вирус успевает поразить большую часть печеночных клеток.

Чтобы выявить болезнь как можно раньше, врачи дают направление на анализ крови Anti hcv total. Что это исследование дает для диагностики? Оно позволяет с высокой точностью определить наличие вируса задолго до возникновения первых симптомов гепатита C. Это дает возможность назначить терапию как можно скорее, пока болезнь еще не начала разрушать печень.

Кому назначают анализ?

Прежде всего, инфекционисты назначают этот анализ пациентам с признаками поражения печени, чтобы определить тип заболевания. Это исследование показано и больным гепатитом, проходящим курс терапии, для выявления эффективности лечения.

Кроме этого, исследование назначают людям, которые имеют повышенный риск заражения:

  • лицам, получившим переливание крови до проведения обязательного исследования донора на гепатит C;
  • детям, рожденным от инфицированных матерей;
  • ВИЧ-инфицированным;
  • пациентам, находящимся на гемодиализе;
  • медицинским работникам;
  • больным перед проведением операции;
  • пациентам с отклонениями в биохимическом исследовании крови на билирубин и печеночные ферменты;
  • людям, употребляющим (или употреблявшим в прошлом) наркотики в виде инъекций.

Показания для ИФА

Обратиться к врачу, а впоследствии и сдать кровь на суммарные антитела к гепатиту С необходимо при возникновении специфических признаков инфекции.

Заподозрить патологию можно по следующим симптомам:

  • почти не проходящее чувство усталости;
  • нарушения сна (обычно в ночное время суток человек мучается от бессонницы, а в дневное – от сонливости);
  • снижение концентрации внимания, замедление остроты умственной деятельности;
  • снижение аппетита;
  • неприятное чувство распирания, тяжести и дискомфорта в правом подреберье;
  • нарушения пищеварения, сопровождающиеся метеоризмом, расстройствами стула, изжогой, отрыжкой, неприятным привкусом во рту;
  • желтизна (часто, незначительная и быстро проходящая) кожного покрова, белков глаз.

Но более чем у половины инфицированных вирусная инфекция протекает без выраженной клинической картины, а возникающие признаки легко спутать с ОРВИ или банальным переутомлением. Именно поэтому гепатит С часто выявляют непреднамеренно в ходе подготовки к диспансеризации.

Строгими показаниями к сдаче крови для анализа служат:

  • характерные для нарушения функции печени симптомы;
  • общее недомогание;
  • отклонения от нормы при расшифровке результатов печеночных проб;
  • контакт с человеком, у которого подтвержден диагноз гепатита С (половой акт, соприкосновение с кровью или слизистыми и т.д.);
  • наличие ВИЧ;
  • гемотрансфузия или пересадка органов, выполненная до 1992 года;
  • регулярное прохождение процедуры гемодиализа;
  • заболевания, требующие частых инвазивных медицинских манипуляций;
  • у детей, рожденных от инфицированных HCV матерей;
  • оформление медицинской книжки для военнослужащих, работников в сфере торговли, здравоохранения, образования, косметологии, фармации.

Обязательным является проведение ИФА при беременности. Исследование выполняют на 12 и 30 неделе.

Не стоит забывать о таком понятии, как «серологическое окно». Под этим термином подразумевает срок, прошедший с момента инфицирования до времени, когда выявляется вирус, а точнее – вырабатываемые к его антигенам антитела.

Повторное проведение ИФА назначают при:

  • неопределенных результатах первого анализа;
  • прохождении противовирусной терапии (для контроля титра антител);
  • Anti-HCV Total отрицательном, но сохранении симптомов вирусного гепатита.

По мнению специалистов, риску заражения подвергается практически каждый посетитель стоматологического или косметологического кабинета. Поэтому с целью профилактики Анти ВГС Тотал (определение суммарных антител методом ИФА) рекомендуют сдавать ежегодно.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *